常見問題：

1.該細胞對培養基及血清的質量要求較高，其中任何一個質量不好都會導致后續培養過程中細胞的分化，特別是傳3、4代以后細胞容易出現分化，細胞變大，貼壁較緊，呈典型“攤雞蛋”樣；

2.該細胞在傳代或復蘇后，剛貼壁時會有短小的突觸，但細胞胞體還是呈圓形或近圓形；待細胞培養2-3天后，短小突觸會消失；

3.如果用胰酶消化，經驗不足時，極易導致后續細胞形態的改變，也不容易將細胞消化下來；

4.如果用細胞刮將細胞刮下來，容易導致大量細胞死亡和細胞形態的改變，也不容易分散為單細胞；

5.該細胞不管在任何密度下，只要是更換了新鮮培養基后緊接著進行吹打，細胞會很難從培養瓶壁上脫落。

推薦的傳代方法有以下兩種：

方法一：該細胞在細胞密度較大，培養基較黃時，不要去除舊培養基，用移液管直接對培養瓶壁上的細胞進行吹打，使細胞從壁上脫落。細胞脫落后可加入新鮮的完全培養基混勻后分瓶；也可收集培養瓶中的細胞懸液，離心后，棄上清，再用新鮮的完全培養基重懸細胞后分瓶，進行培養。這種方法容易出現的問題是，如果操作者經驗不足，可能導致部分細胞無法脫落。

方法二：細胞密度達到80～90%，需要進行傳代時，可在培養瓶中的原培養基中滴加1～2滴無菌的HEPES緩沖液（視培養瓶中培養基的體積適當可以增加HEPES*的用量），作用1～2min，使培養基PH變酸，培養基顏色變黃，直接用移液管進行吹打，這時細胞會很輕易脫落，并成單細胞。細胞脫落后可加入新鮮的完全培養基混勻后分瓶；也可收集培養瓶中的細胞懸液，離心后，棄上清，再用新鮮的完全培養基重懸細胞后分瓶，進行培養。

*HEPES：4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸